Kultura tat-Tessut tal-Pjanta tal-Kannabis: X'inhi?

• 1. L-istorja tal-kultura tat-tessut
• 2. Il-bażiċi tal-kultura tat-tessut
• 3. X’inhi kultura tat-tessut tal-pjanti u kif taħdem?
• 4. Kultura tat-tessut vs klonazzjoni
• 4. a. Klonazzjoni
• 4. b. Kultura tat-tessut tal-pjanti
• 5. Il-5 passi tal-kultura tat-tessut
• 5. a. Kif tagħmel kultura tat-tessut tal-pjanti d-dar
• 5. b. L-gwida tal-kompożizzjoni kimika
• 6. Bħala konklużjoni

Kultura tat-tessut tinvolvi li tieħu tessut ħaj minn pjanta u tikber dan it-tessut f’pjanta sħiħa f’kundizzjonijiet sterili. Dan il-proċess ilu jeżisti mill-1885 u għadu pjuttost ġdid mal-żerriegħa tal-kannabis iżda huwa effettiv ħafna u jistaʼ jintuża ma' ħafna speċi ta’ pjanti. Il-kultura tat-tessut twassal għal sors stabilizzat ta’ tessut tal-pjanta li t-teknini jistgħu jippreservaw billi jimmultiplikaw iċ-ċelloli tal-pjanta. Billi jinżamm dan il-ġermoplasma f’faċilitajiet nodfa u siguri, dawn jistgħu jżommu u jkomplu jimmultiplikaw kultivari speċifiċi jew fenotipi ta’ pjanti. Din it-teknika tgħin biex jiġu ppreservati pjanti rari, jew biex jinżammu fenotipi produttivi u potenti ħajjin u f’saħħithom biex jintużaw fil-ġonna jew fil-għelieqi, meta jiġu mmultiplikati. Tista' tħares lejn il-kulturi tat-tessut bħala "banek" ta’ ġenetika li jinżammu f’kundizzjonijiet speċjali sakemm ikunu meħtieġa għal trapjant f’kontenituri jew fit-tarf barra.

1. L-Istorja tal-Kultura tat-Tessut

L-istorja tal-kultura tat-tessut tmur lura għall-1885 meta żoologu Ġermaniż pprova jikber tessut minn embrijun ta’ tiġieġa, iżda ma kienx sal-1907 meta żoologu Amerikan irnexxielu jikber ċellula ta’ nerv ta’ żrinġ.

Aktar tard, fl-1910 kirurgu Franċiż ittrijbuża din it-teknika u definixxa eżattament x’inhi l-kultura tat-tessut. Wara li ġiet iddefinita u stabbilita t-teknika, diversi esperimenti oħra rnexxew u ppermettew lil riċerkaturi jikbru ċelloli staminali taħt kundizzjonijiet artifiċjali, li wasslu għal aktar għarfien dwar il-bijoloġija umana u avvanzi kbar fil-mediċina rigenerattiva. Imma, jista’ jkollok il-mistoqsija Kif dan jgħodd għall-kannabis?

2. Il-Bażiċi tal-Kultura tat-Tessut

Qabel ma nidħlu aktar fil-fond fil-kultura tat-tessut, kif taħdem u d-differenzi bejn il-kultura tat-tessut u l-klonazzjoni, ejja nitgħallmu dwar l-affarijiet essenzjali tal-kultura tat-tessut.

Riċerka

Jekk qed tipprova l-kultura tat-tessut id-dar, l-ewwel ħaġa hija li tfittex jekk kienet diġà saret b’suċċess ma’ dik l-istess strain sabiex tista’ ssegwi l-istess proċedura u forsi tużaha bħala linja gwida biex tkun taf x’għandek tagħmel jew le.

Tessut tal-Pjanta

Issa li taf x’għandek issegwi, li jmiss trid tikseb il-pjanta li trid tuża għall-proċess tal-kultura tat-tessut. Il-pjanta donatriċi għandha tkun 100% b’saħħitha u mingħajr mard. Il-parti tal-pjanta li tuża tiddependi minn pjanta għal oħra, u għalhekk aqbad mal-linji gwida msemmija qabel biex iżżid iċ-ċans ta’ suċċess. Ftakar li dan il-proċess jiddependi fuq ambjent nadif, għalhekk kun żgur li kollox hu nadif u sterilizzat, inkluż il-ħwejjeġ tiegħek, il-materjal, u l-kamra stess għax il-kontaminazzjoni hija r-raġuni ewlenija ta’ falliment.

Arja

Li jmiss hija l-arja, hekk kif il-pjanti għandhom bżonn arja nadifa, u sabiex tiżgura l-arja nadifa tista' tixtri kaxxa b’idejn għamla ta' nuċċali jew tagħmel waħda int stess billi tuża tank tal-ħut qadim u t-tubi tal-PVC, pereżempju.

Il-Mezz

Wieħed mill-aktar partijiet importanti tal-kultura tat-tessut huwa l-mezz, peress li fih titqiegħed il-pjanta ladarba tkun kbira biżżejjed. Il-mezz għandu jkun materjal ġelatina simili li jipprovdi stabbiltà u appoġġ għall-iżvilupp tal-għeruq u t-tkabbir tal-pjanta, u nutrijenti biex il-pjanta jkollha l-enerġija biex tikber, għalhekk wieħed mill-aktar mezzi popolari huwa l-Agar.

Issa li għandek idea aħjar ta’ x’għandek bżonn, aqra aktar biex tifhem kif tagħmel kultura tat-tessut fuq il-pjanti tal-kannabis u t-tipi kollha ta’ pjanti. Ftakar biss li l-kultura tat-tessut tistaʼ tkun diffiċli jekk m’għandekx il-materjal u tagħmir xieraq iżda m’hemmx għalfejn tinkwieta. Dejjem tista’ klona l-pjanti tiegħek; Għalkemm in-numru ta’ kloni jiddependi min-numru ta’ fergħat li tikber il-pjanta tiegħek, huwa ħafna ħafna aktar faċli u ma jeħtieġx ħafna esperjenza. Kulma għandek bżonn huwa ġel tal-klonazzjoni u scissors, kollox lest!

3. X’inhi Kultura tat-Tessut tal-Pjanti u Kif Taħdem? 

Il-kultura tat-tessut hija eżattament kif ġie spjegat hawn fuq, jiġifieri tittratta biss ftit biċċiet ta’ tessut tal-pjanta jew ċelloli u tiżviluppa mijiet jew eluf ta’ kloni identiċi minnhom. Din il-metodu tippermetti lill-kultivaturi jippreservaw ċerta strain kważi għal dejjem waqt li jeħtieġu biss ftit spazju u sforz. Bħal klonazzjoni normali, il-kultura tat-tessut tibda billi tiċċekkja parti żgħira mill-pjanta li trid tiklona, iżda b’differenza mill-klonazzjoni normali, il-kampjun ta’ tessut huwa mqatta’, sterilizzat, u ladarba jkun nadif, imur f’kultura nutrittiva li fiha mhux biss nutrijenti iżda wkoll ormoni u zokkor.

Din il-kultura nutrittiva tinħadem apposta għal kull kultura tat-tessut għaliex xi nutrijenti u ormoni jipprovokaw ċerti stadji tal-iżvilupp, allura jekk trid tqajjem it-tkabbir, l-iżvilupp tal-għeruq jew il-multiplikazzjoni (meta l-pjanta tkun kbira biżżejjed), ser ikollok tagħti kultura nutrittiva speċifika għat-tkabbir li trid. Essenzjalment, ikollok biċċa tessut u ladarba tkun kbira biżżejjed, tista’ taqsmu fi bosta biċċiet għal klonazzjoni separata, jekk hekk tixtieq. Malli dawn it-tessuti jkunu kemm iridu jikbru, jiġu mogħtija kultura nutrittiva li tinkoraġġihom jagħmlu għeruq u mbagħad jikbru.

4. Kultura tat-Tessut vs Klonazzjoni

Hekk kif l-industrija tal-kannabis tavvanza, il-kultivaturi kummerċjali qed ifittxu l-aħjar mod biex jiksbu aktar żidiet u potenza f’inqas ħin. Meta jkun possibbli, il-kultivaturi qed ibiddlu mill-klonazzjoni għall-kultura tat-tessut—imma għaliex?

Klonazzjoni 

Kif diġà taf, il-klonazzjoni tikkonsisti li taqta’ fergħa minn pjanta u tistenna li tiżviluppa għeruq biex tkun tista’ tikber, u dan il-klon isir kopja eżatta tal-omm tiegħu.

Iżda kloni jistgħu jkunu mhux affidabbli bħa-żerriegħa għaliex jista’ jkun diffiċli li ssalva persentaġġ kbir minnhom u mhux biss hekk, huma suxxettibbli għat-parassiti, infezzjonijiet, u mard, u hekk kif jgħaddu l-ġenerazzjonijiet, hemm aktar ċans li tiġu mutazzjonijiet ġenetiċi. Issa, bil-kultura tat-tessut, hu pjuttost differenti.

Kultura tat-tessut tal-pjanti

Il-proċess tal-kultura tat-tessut huwa relattivament sempliċi iżda jeħtieġ ħafna kontroll biex jiżgura li jinżammu l-kundizzjonijiet korretti; il-laboratorji għall-kultura tat-tessut jeħtieġu:

Sterilizzazzjoni

Il-kulturi tat-tessut jeħtieġu ambjent ideali għall-pjanti sabiex jikbru u dan l-ambjent għandu jagħti kollox b’forma faċli biex tiġi assorbita, iżda dan l-ambjent hu wkoll ideali għall-batterji u mikro-organiżmi ħżiena għalhekk kollox għandu jkun sterilizzat. Din l-isterilizzazzjoni hija essenzjali għaliex fungi jew batterji jistgħu joqtlu l-pjanti tiegħek, għalhekk mhux biss il-laboratorju għandu jkun sterilizzat iżda wkoll l-għodda, tagħmir u anke t-tessut tal-pjanta (jiġifieri “explant”).

Ambjent aċċettik  

Hu vitali li l-proċess kollu jsir f’ambjent kompletament sterili għalhekk, f’kundizzjonijiet ideali, jinħoloq kamra speċjali sabiex inti tmiss l-għodod li diġà huma sterili. Dan l-ambjent speċjali jintuża kull darba li jkollok teħles kwalunkwe ħaġa bħalma huma l-għodda, tagħmir, jew tessut għall-arja.

Il-mard jista’ jidħol faċilment fis-soqfa tax-xogħol; spori tal-fungi huma madwarna fl-arja kontinwament. Biex jiġi evitat it-tniġġis tal-pjanti in vitro (dawk li jikbru f’kontenituri tal-ħġieġ bħalma huma petri dishes), it-teknini jaħdmu spiss quddiem jew taħt flow hood. Dawn l-apparat jimxu l-arja permezz ta’ filtru HEPA—biċċa tagħmir kapaċi tiffiltra kontaminanti żgħar ħafna mill-arja bħalma huma virus, batterji u spori tal-fungi. L-arja nadifa tgħaddi fuq l-ispazju tax-xogħol f’flow laminar, li tipprevjeni partikuli milli jaqgħu fuq petri dishes miftuħa.

Mezz speċjali għat-tkabbir

Bil-kultura tat-tessut tal-pjanti, mezz sterili jinħadem biex jipprovdi lill-pjanta nutrijenti, zokkor, ilma, u post fejn jikbru, dan il-mezz jipprovdi dak kollu li ghandek bżonn biex il-pjanti jirnexxu sa jkunu pjanta sħiħa. Dan il-mezz jista’ jsir id-dar b’trab speċjali, zokkor u ilma distillat pH f’5.8, għalhekk għalkemm huwa sempliċi relattivament, jeħtieġ ħafna prekawzjonijiet.

5. Il-5 Passi tal-Kultura tat-Tessut

Hawn huma l-5 passi sempliċi tal-kultura tat-tessut tal-pjanti fil-laboratorju, ftakar li dan huwa sommarju tal-proċess kollu.

1. Agħżel il-pjanta li trid tuża;
2. Poġġi t-tessut f’ambjent sterili, neħħi biċċa, naddafha u ħalliha tikber fil-mezz xieraq;
3. Żgura kundizzjonijiet tajba u ħalli t-tessut jimmultiplika (tipikament jieħu 14-il jum);
4. Iġiegħel il-pjanta tagħmel għeruq;
5. Trapjant fl-aħħar kontenitur u ħalliha tikber.

Issa, jekk trid pass pass aktar dettaljat u kif tagħmlu d-dar, hawn gwida, ftakar biss li ser ikollok bżonn għodda għalja, allura għalkemm huwa DIY, trid tagħmir speċjali.

Kif tagħmel kultura tat-tessut tal-pjanti d-dar

Jekk inti interessat f’gwida dwar kif tagħmel kultura tat-tessut tal-pjanti tal-kannabis, hawn pass pass dettaljat, kif intqal hawn fuq, ser ikollok bżonn tagħmir speċjali imma hu possibbli tagħmel dan id-dar.

Fażi tal-bidu (1-2 ġimgħat)

Pass 1

Iċċanta l-flow hood u ħaddmu għal mill-inqas 30min qabel tibda, jekk m’għandekx flow hood tal-laminar, uża burner/alamp tal-alkoħol u aħdem qrib il-fjamma.

Pass 2

Sterilizza l-flow hood b’70% etanol imma tixridx direttament fuq il-filtru.

Pass 3

Iddawwal l-isterilizzatur tiegħek u ħallih jissaħħan għal 20min.

Pass 4

Sterilizza pakkett tal-karta fuq ċiklu niexef, imbagħad sterilizza l-vasilli, ilma u tween fuq ċiklu bil-mod.

Pass 5

Biex tipprepara l-mezz, ħu kontenitur, imlieh b’ilma ta’ reverse osmosis, distillat jew dejonizzat (l-aqwa). Jekk tagħmel 1L mezz, żid 900ml ilma. Ladarba jkollok l-ilma lest, żid Grow nutrients sakemm tilħaq EC ta’ 1.5, imbagħad żid 30g/L zokkor u aġġusta l-pH tas-soluzzjoni għal 5.7, imbagħad żid 6g/L agar u poġġiha f’flixkun li jista’ jiġi sterilizzat iżda tferrax iżżejjed. Agħmel il-flixkun fl-isterilizzatur għal 15-il minuta u mbagħad ferraq madwar 50ml f’kull vasell sterilizzat li se tuża.

Pass 6

Issa li l-mezz lest, ipprepara soluzzjoni b’0.5% bleach u 0.1% sterile tween 20, jekk għandek biss 2.75% bleach, żid 181ml għal kull 1L.

Pass 7

Imla kontenitur b’kemm ftit ilma, ħu l-materjal tal-kannabis tiegħek, u poġġih fl-ilma, kun żgur li l-materjal tal-pjanta huwa b’saħħtu. Jekk ser taħżen il-materjal tal-pjanta għal aktar minn 1 siegħa, poġġih f’cooler b’ġlata u pprova daħħlu fl-ilma malajr kemm jista’ jkun.

Pass 8

Agħmel kontenitur sterilizzat li jista’ jintixef u imlieh 80% bis-soluzzjoni bleach/tween, imbagħad żid il-materjal tal-pjanta u agħlaqha.

Pass 9

Ìżomm il-kontenitur bil-mod għal 20 minuta u mbagħad ħawwad bil-qawwa għal 20 sekonda wara l-ewwel 20 minuta.

Pass 10

Ittrasferixxi l-materjal tal-pjanta għal vasell ieħor mimli b’80% ilma sterilizzat u agħmilha bil-mod għal 5 minuti u irrepeti darbtejn oħra.

Pass 11

Uża forceps sterili biex tittrasferixxi il-materjal tal-pjanta fuq biċċa karta sterili biex tassorbi l-ilma żejjed u mbagħad poġġi biċċa waħda ta’ materjal għal kull vasell. Il-pjanta għandha tkun f’pożizzjoni wieqfa fil-vasell u mbagħad titqiegħed fuq xkaffa f’25°C taħt ċiklu ta’ dawl 18/6 għal minimu ta’ 3 ġimgħat. Ladarba l-pjanti tiegħek ikunu lesti, tkun kiber klonu b’suċċess u issa tkun lesta għal tkabbir fil-mezz li tippreferi, kemm barra kif ukoll ġewwa.

L-Gwida tal-Kompożizzjoni Kimika 

Ftakar li hemm tipi differenti ta’ mezzi, il-minerali u l-ammont jistgħu jinbidlu skont it-tip ta’ mezz li qed tuża; din il-gwida nkitbet bl-użu tal-mezz Murashige-Skoog bħala eżempju, allura aqra u sib liema ingredjenti u kwantitajiet huma preferuti fil-mezz li tuża.

Dawn huma n-nutrijenti essenzjali li pjanti tal-kannabis tiegħek għandhom bżonn f’ammonti għoljin u huma essenzjali fil-kultura tat-tessut; mingħajrhom il-pjanti tiegħek ma jkollhomx tkabbir aħdar.

Dawn huma n-nutrijenti essenzjali li pjanti tal-kannabis għandhom bżonn f’ammonti iżgħar iżda wkoll essenzjali fil-kultura tat-tessut; mingħajrhom, il-pjanti tiegħek ma jikbrux sew u żgur juru sintomi ta’ defiċjenza.

Dawn il-vitamini huma essenzjali biex jgħinu fil-metaboliżmu tal-pjanti tiegħek, speċjalment fil-kultura tat-tessut, għalhekk kun żgur li tipprovdi biżżejjed minnhom u fil-kwantità t-tajba.

6. Bħala Konklużjoni

Il-kultura tat-tessut tal-kannabis tistaʼ tidher diffiċli iżda fil-fatt hija pjuttost sempliċi; jeħtieġ biss li tiżgura l-aħjar kundizzjonijiet u tieħu l-prekawzjonijiet kollha sabiex tiżgura l-ogħla rata ta’ sopravivenza. Nafu li din it-teknika hija ġdida relattivament u tista’ tkun għalja u mhux il-kultivaturi kollha jistgħu jaċċessaw it-tagħmir meħtieġ, imma jekk taħdem jew ħloqt laboratorju għall-kultura tat-tessut id-dar, jekk jogħġbok aqsam l-għarfien tiegħek ma’ growers oħra, ħalli kumment hawn taħt!

Referenzi esterni

1. Plant Tissue Cultures. - Kärkönen, Anna & Santanen, Arja & Iwamoto, Kuninori & Fukuda, Hiroo. (2020). 
2. Nanotechnology and Plant Tissue Culture. - Tariq, Amina & Ilyas, Saiqa & Naz, Shagufta. (2020). 
3. Plant Tissue Culture Media, Recent Advances in Plant in vitro Culture. - Annarita Leva and Laura M. R. Rinaldi (2012).